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T/GDBK 007-2023 焙烤食品中丙烯醛的快速测定酶标仪法（荧光探针法）

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标准T/GDBK 007-2023标准状态

发布于：2023-10-20
实施于：2023-10-20
废止

标准详情

标准名称：焙烤食品中丙烯醛的快速测定酶标仪法（荧光探针法）
标准号：T/GDBK 007-2023
中国标准分类号：C141
发布日期：2023-10-20
国际标准分类号：67.050
实施日期：2023-10-20
团体名称：广东省焙烤食品糖制品产业协会
标准分类：C 制造业食品技术

内容简介

本文件规定了焙烤食品中丙烯醛含量测定的荧光法快速测定的原理、试剂和材料、仪器设备、样品制备、试验步骤、试验数据处理、精密度和试验报告等本文件适用于焙烤食品中丙烯醛的测定，方法检出限为1.12μg/kg，定量限为3.92μg/kg4　原理N-乙酸甲酯-4-巯基-1，8-萘酰亚胺中的巯基对萘酰亚胺荧光母核具有PET效应，其本身荧光十分微弱；而当丙烯醛存在的情况下，N-乙酸甲酯-4-巯基-1，8-萘酰亚胺的巯基与丙烯醛通过迈克尔加成反应形成加合产物，使得PET效应被抑制，加合物在波长380nm发射光激发下产生强荧光，峰值在510nm波长处，其荧光强度在固定条件下与待测样品中丙烯醛浓度成正比，使用带荧光检测器的酶标仪检测，外标法定量
荧光探针法测定丙烯醛的原理见图1
图1荧光探针法测定丙烯醛的原理图5　试剂和材料　5.1　试剂除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水
4-溴-1，8-萘二甲酸酐（分析纯）
甘氨酸（分析纯）
三乙胺（分析纯）
乙醇（分析纯）
盐酸（分析纯）
对甲苯磺酸（分析纯）
甲醇（分析纯）
九水合硫化钠（分析纯）
二甲基亚砜（DMSO，分析纯）
柠檬酸（分析纯）
磷酸氢二钠（分析纯）
丙烯醛（分析纯）
5.2　荧光探针的制备将554mg4-溴-1，8-萘二甲酸酐和165mg甘氨酸、252mg三乙胺在80℃的乙醇回流磁力搅拌反应6h，反应完成后冷却至室温，向反应液中加入2.5mL1M盐酸溶液调节pH至白色沉淀析出，经抽滤得到的固体分别用10mL水和乙醇进行洗涤，得到的白色固体即为N-乙酸基-4-溴-1，8-萘酰亚胺；室温下，将167mgN-乙酸基-4-溴-1，8-萘酰亚胺和600mg九水合硫化钠溶解于5mLN，N-二甲基甲酰胺中搅拌反应24h，反应结束后将反应液倒入20mL水中，并用1M盐酸水溶液调节pH至2，有黄色沉淀析出
经抽滤得到的固体用水洗涤五遍后，得到的黄色固体即为N-乙酸基-4-巯基-1，8-萘酰亚胺（Pr-ACR），冷冻干燥，置于-20℃冰箱中备用
5.3　试剂配制柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液pH为2.2，1mmol/L，15.198g一水合柠檬酸和1.955g十二水合磷酸氢二钠溶解于水中，再用250mL容量瓶定容
探针母液：2.15mgPr-ACR溶于0.5mLDMSO中，制成浓度为150mmol/L探针母液，母液要现配现用
探针工作液：移取50μLPr-ACR母液加入到5mL容量瓶中，用4.3.1的缓冲溶液定容到5mL，工作液要现配现用
5.4　标准品丙烯醛标准品（C3H4O,CAS号：107-02-8）：纯度大于98.0%
5.5　标准溶液的配置用水配制成丙烯醛浓度为30μmol/L的溶液，再用水稀释混匀得到一系列浓度的标准溶液（0μmol/L、3μmol/L、6μmol/L、12μmol/L、18μmol/L、24μmol/L、30μmol/L）
6　仪器设备6.1　酶标仪（带荧光检测器，Ex250-600nm，Em280-600nm)
6.2　96孔板（黑色）
6.3　粉碎机(细度30-100目）
6.4　天平：感量0.00001g
6.5　移液枪（1μL-10μL、10μL-100μL和100μL-1000μL）
6.6　常规玻璃仪器
6.7　离心机（12000转/分，14000×g)
7　试验步骤7.1　准曲线的绘制移取100μL4.3.3中的探针工作液到96孔板中，再加入50μL4.5中不同浓度的丙烯醛标准液，使丙烯醛浓度分别为0μmol/L、1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、6μmol/L、8μmol/L、10μmol/L，摇匀，并置于25℃下反应90min后，置于酶标仪中进行荧光检测，读取波长510nm处的荧光强度值（激发波长为380nm），其荧光发射光谱图见附录A
7.2　样品的制备将1g磨碎的食品粉末加入到15mL离心管中，加入5mL水，搅拌均匀并超声提取20min，再用离心机在10000r/min的转速下离心20min，收集上清液
离心管中的沉淀物质再用2mL水按上述操作重复提取两次，合并3次提取得到的上清液，定容到10mL，备用
7.3　样品的测定　移取100μL4.3.3中的探针工作液到黑色96孔板中，再加入50μL6.2中的样品提取液，摇匀，置于25℃下反应90min后，用酶标仪进行荧光检测，读取波长510nm处的荧光强度值（激发波长为380nm），每次处理重复3次
7.4　空白实验除不称取样品外，均按照上述测定条件和步骤进行
8　试验数据处理样品中丙烯醛的含量按以下公式计算：……………………………………（1）式中：X——样品中丙烯醛的含量，毫克/千克（mg/kg)；56.06——丙烯醛的摩尔质量；C——样品液中丙烯醛的摩尔质量浓度，微摩/升（μmol/L)；V——被测样品的总体积，毫升（mL）；m——称取样品的质量，克（g）
计算结果以重复性条件下获得的3次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字
9　精密度9.1　一般规定本文件的精密度按照GB/T6379.2的规定确定，重复性和再现性的值以95%的可信度来计算
9.2　重复性在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%
9.3　再现性在再现性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%
10　试验报告试验报告至少应给出以下几个方面的内容：——试验对象；——所使用的标准；——所使用的方法；——结果；——观察到的异常现象；——试验日期
附录A（资料性）荧光发射光谱图

起草单位

胡志高、郑萍、林国强、吕品、欧隽滢、罗紫明、钟光波、唐丽、唐光华、唐雪娟、欧仕益、陈伦韬、黄思韵、陈琼华、谭应职、张发妙、黄焯枝、冯鹏、叶文杰、陈丽红、莫康扬、李蓉、陈月玲、吴小勇、朱华兴、叶文杰、李向丽、张延杰、刘金川、董二飞、范雪琳、张瑶、谈欣乐、普昕瑞、吴洁伊、黄乐炫。

起草人

中山市食品学会、中山洪力健康食品产业研究院有限公司、咀香园健康食品（中山）有限公司、广东省焙烤食品糖制品产业协会、暨南大学、中山市日威食品有限公司、利诚检测认证集团股份有限公司、中山市强晟水产养殖有限公司、中山海关技术中心、广东省科学院测试分析研究所（中国广州分析测试中心）、华南农业大学、廉江市检验检测中心、广东药科大学、广东省中山市坦洲镇农业服务中心、广州广电计量检测股份有限公司、中山市技师学院、中山市第一职业技术学校、中山市食品药品检验所、中山联测检测技术有限公司、达能（中国）食品饮料有限公司、中山市农产品质量安全检验所、中山市神湾镇大石头盘菠萝专业合作社、中山永恒检测科技有限公司、创味舌尖冻干食品科技（中山）有限公司、中山市火炬高技术产业开发区食品药品监督所、中山火炬职业技术学院、广东省焙烤食品产业技术创新联盟。

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